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Por otra parte se adelantaran diversos estudios para la estandarización del ensayo de invasión.
Se optimizara el marcaje de la bacteria, seleccionándose el fluorocromo SYBR safe, concentración y tiempo de incubación con el cual se obtuvo un mayor porcentaje de bacteria marcada.
Se cuantificara la multiplicidad de infección (MOI) a ser empleada durante el desarrollo del ensayo.
De igual forma se evaluara si la bacteria detectada por citometría de flujo se encuentra de forma intracelular o adherida a la superficie de la célula.
Debido al alto riesgo que conlleva trabajar con M. tuberculosis será necesario evaluar la manera más efectiva y que menos interfiriera con el ensayo para la inactivación del patógeno, empleándose la amikacina y fijando al final del ensayo con paraformaldehido al 1%. Una vez estandarizadas las condiciones descritas, se evaluara el efecto de inhibidores de invasión tales como citocalasina y colchicina.
Con las condiciones estandarizadas anteriormente descritas, se procederá a probar la capacidad de inhibición de los péptidos de alta unión, lo cual será una herramienta que permitirá realizar una selección de péptidos con
relevancia funcional y biológica como subunidades en el diseño y construcción de una vacuna frente a la tuberculosis. |
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Identificación de genes relevantes para el desarrollo de vacunas contra agentes patógenos y |
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Para el desarrollo de los objetivos 1, 2 y 3 esta organizado en tres subproyectos |
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