Fundación Instituto de Inmunología de Colombia

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02-GF RECEPTOR-LIGANDO
	OBJETIVOS ESPECIFICOS
	Subproyecto: 01-Determinación de las regiones de unión a células blanco derivadas de proteínas de patógenos y su posible papel en el proceso de invasión.
	METODOLOGIA
	El Grupo Funcional Receptor-Ligando se forma en 1990 en el Instituto de Inmunología del Hospital San Juan de Dios con el objetivo de identificar las regiones derivadas de las proteínas del merozoito de Plasmodium falciparum que se unen a los glóbulos rojos humanos, evaluar su papel en la invasión in vitro y su potencial en el desarrollo de una vacuna sintética contra la malaria.

A partir de los resultados obtenidos con proteínas de merozoito, se siguió la misma metodología para identificar regiones derivadas de proteínas de esporozoito de Plasmodium falciparum que se unen a células hepáticas. Actualmente, la metodología se aplica para determinar regiones derivadas de proteínas de diferentes patógenos que se unan a sus respectivas células blanco y su posible papel en el proceso de invasión.

Durante esto 23 años, se han mapeado cerca de 90 proteínas derivadas de Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, virus de Epstein-Barr (EBV), virus del papiloma humano (VPH), Mycobacterium tuberculosis, virus de la hepatitis C (VHC), virus del dengue y Leishmania. Esto ha permitido la publicación de 82 artículos científicos en revistas de alto impacto, así como la formación de 5 PhD, 8 MSc y 16 estudiantes de pregrado.

Para el logro de los objetivos propuestos y el desarrollo de la metodología, el Grupo Receptor-Ligando trabaja en colaboración con los diferentes Grupos Funcionales de la Fundación Instituto de Inmunología de Colombia-FIDIC, entre ellos, Química-Síntesis, RMN-Cálculo Estructural, Virología, BM Tuberculosis, BM Malaria, Inmunología Celular y Molecular.

Actualmente se están implementando otras técnicas (no radioactivas) para el estudio de las interacciones del tipo Receptor-Ligando, como el uso de biosensores (BiaCore) que utilizan como principio la resonancia de plasmones desuperficie, ensayos de Overlay, expresión de proteínas en el sistema de células COS-7 y calorimetría de titulación isotérmica (ITC).

	Identificación de genes relevantes para el desarrollo de vacunas contra agentes patógenos y
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	Para el desarrollo de los objetivos 1, 2 y 3 esta organizado en tres subproyectos
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	Todas las Publicaciones y artículos científicos internacionales y nacionales.
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De manera general, la metodología seguida es la siguiente:

1. Selección y caracterización de proteínas implicadas en procesos de invasión.
2. Síntesis de las proteínas seleccionadas en péptidos de 20 residuos (Grupo Química-Sintesis).
3. Ensayos de unión péptido-célula huésped. Este ensayo comprende la radio-marcación con 125I de cada uno de los péptidos, seguido de la incubación con las células para determinar la unión específica.
4. Determinación de las constantes cinéticas de la reacción. Este ensayo se realiza únicamente con las regiones de unión específicas o HABPs (Del inglés, High Activity Binding Peptides) a las células huésped. Aquí se calcula la constante de disociación (KD), el coeficiente de Hill (nH) que nos determina cooperatividad y el número sitios de unión por célula.
5. La naturaleza del receptor sobre la célula huésped se evalúa mediante un ensayo de unión entre los HABPs y las células huésped tratadas enzimáticamente.
6. El peso molecular del receptor se determina, realizando un ensayo de unión y entrecruzamiento HABPs radiomarcado-membrana celular. Luego de separar las proteínas mediante electroforesis denaturante (SDS-PAGE), se incuba el gel con placa fotográfica y luego de revelar se calcula el peso molecular del receptor.
7. El papel de los HABPs en la invasión se evalúa mediante ensayo de inhibición de la invasión in vitro (Plasmodium falciparum).
8. Para determinar la expresión de una proteína putativa, se utilizan herramientas de bioinformática para la selección de péptidos inmunogénicos que se inoculan en conejos o ratones. Con los anticuerpos policlonales obtenidos se realizan ensayos de inmunofluorescencia indirecta (IFIs) o de Western blot.

GF-QUIMICA SINTESIS | GF-RECEPTOR LIGANDO | GF-RMN CALCULO ESTRUCTURAL | GF-BIOCATALISIS|GF-BIOMATEMATICAS

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